Одређивање садржаја оксалне киселине у воћу и поврћу методом високоефикасне течне хроматографије (HPLC)
1. Експериментални принцип и дизајн методе
Као уобичајена органска киселина у воћу и поврћу, садржај оксалне киселине директно утиче на укус и нутритивну вредност хране. Овај експеримент користи течну хроматографију високих перформанси са обрнутом фазом (RP-HPLC). У условима киселих мобилних фаза, оксална киселина се одваја од супстанци које ометају помоћу C18 хроматографске колоне. За квантитативну анализу, засновану на карактеристикама УВ апсорпције карбоксилних група у молекулима оксалне киселине, користи се ултраљубичасти детектор подешен на 210 nm.
2. Стандардна крива и припрема узорка
За припрему стандардних раствора користи се метод градијентног разблаживања: прецизно се одмери 25,0 мг дихидрата оксалне киселине и разблажи до 25 мл ултрачистом водом да би се добио основни раствор од 1 мг/мл. Ово се секвенцијално разблажује у серију стандардних раствора од 50, 100, 200, 400 и 800 µг/мл, при чему се свака концентрација убризгава у три примерка.
За припрему узорка користи се екстракција уз помоћ микроталаса: измерити 5,00 г хомогената воћа/поврћа, додати 10 мл раствора хлороводоничне киселине концентрације 0,1 мол/л, третирати микроталасима на 60°C током 10 минута, филтрирати кроз мембрански филтер од 0,45 µм и сакупити филтрат за испитивање.
3. Оптимизација хроматографских услова
Мобилна фаза је систем калијум дихидроген фосфатног пуфера (pH 2,5) - ацетонитрил (95:5) концентрације 0,01 mol/L, са брзином протока од 0,8 mL/min и температуром колоне од 35°C. Подешавањем пропорције ацетонитрила показује се да када органска фаза пређе 10%, време задржавања оксалне киселине се скраћује на мање од 3 минута, али долази до појаве „репова“ пика. Под коначним оптимизованим условима, време задржавања оксалне киселине је 4,2 минута, постижући потпуно одвајање од суседне лимунске и јабучне киселине (резолуција > 1,5).
4. Валидација методе
Верификација линеарног опсега показује добру линеарну везу између површине пика и концентрације у опсегу од 10–1000 µг/мл (R² = 0,9993). Граница детекције (LOD), одређена методом односа сигнал-шум, је 0,5 µг/мл. У тестовима поновљивости, RSD за шест поновљених одређивања истог узорка спанаћа је 1,8%. Експерименти опоравка кластера на три нивоа (80%, 100% и 120%) дају просечан опоравак од 98,2%, 102,4% и 97,8%, респективно, што испуњава захтеве за квантитативну анализу.
5. Анализа стварних узорака
Тестирано је шест комерцијално доступних врста воћа и поврћа: спанаћ (356 ± 12 мг/100 г), целер (215 ± 9 мг/100 г), парадајз (18 ± 2 мг/100 г), јабука (6 ± 1 мг/100 г), банана (није детектована) и броколи (89 ± 5 мг/100 г). Поређење са националном стандардном методом (GB 5009.277-2016) показује да је релативно одступање између две методе мање од 5%, што потврђује поузданост ове методе. Посебно, HPLC метода показује већу осетљивост од традиционалних метода титрације при анализи узорака са ниским садржајем.
6. Кључне напомене
Строго контролишите pH вредност током претходне обраде узорка. Ако pH екстракта пређе 3, таложење калцијум-оксалата ће довести до ниских резултата теста. Мобилна фаза треба да се припрема свеже свакодневно како би се избегло таложење соли и зачепљење колоне. Након сваких 20 убризгавања, испрати колону смесом ацетонитрил-вода (30:70) током 30 минута како би се спречило смањење ефикасности колоне. За узорке који садрже пигменте (нпр. љубичасти купус), препоручује се додавање корака пречишћавања екстракцијом на чврстој фази пре убризгавања.
7. Упутства за примену и проширење
Ова метода се може проширити на детекцију оксалне киселине у биолошким узорцима као што су урин и крв. Подешавањем састава мобилне фазе (нпр. додавањем тетрабутиламонијум хидроксида), оксална киселина и њени метаболити могу се истовремено одредити. У комбинацији са детектором масене спектрометрије, може се успоставити прецизнија метода детекције трагова. У прехрамбеној индустрији, ова метода може пружити важну подршку подацима за избор сорти са ниским садржајем оксалне киселине и оптимизацију процеса кувања.
Зибо Анхао Хемикал Ко., Лтд. – Оксална киселина
Zibo Anhao Chemical Co., Ltd. је поуздан добављач и извозник висококвалитетне оксалне киселине (индустријског квалитета, мин. 99,6%) из Шандонга, Кина. Наша оксална киселина је бела кристална чврста супстанца, позната и као етандиојска киселина, са молекулском формулом C₂H₂O₄. Одликује се високом чистоћом, ниским садржајем нечистоћа и стабилним квалитетом у свим серијама, задовољавајући захтеве текстилне, кожарске, металургијске, прераде ретких земаља, хемијског чишћења и грађевинске индустрије.
Испоручујемо и безводну и дихидратну оксалну киселину, доступну у врећама од 25 кг, врећама од 50 кг и врећама од 1000 кг. Строгим процедурама контроле квалитета, комплетним извештајима о испитивању и флексибилним плановима снабдевања, обезбеђујемо стабилну испоруку и конзистентне перформансе за глобалне купце. Наши производи се широко извозе у Југоисточну Азију, Европу, Африку и Америку, где су стекли признање за поуздан квалитет и конкурентне цене.
Изаберите Zibo Anhao Chemical за поуздано снабдевање оксалном киселином и професионалну хемијску услугу на једном месту.
Изаберите Zibo Anhao Chemical за оксалну киселину високе чистоће која пружа стабилне перформансе и вредност за ваше пословање. Контактирајте нас за поруџбине на велико или техничке спецификације: info@anhaochemical.com
